E-SURE : Hemoglobin E Screening Test
1.Use and property
E-sure is a qualitative screening test for Hemoglobin E which is an abnormal beta globin chain of hemoglobin of red blood cell. By using unique buffer solutions and with the electrical charges binding property, only Hemoglobin E is eluded from the column and has color reaction that can be seen in test tube.
2.Brief information
Hemoglobin E, one of beta thalassemia, has a prevalence of 10-50%. When a Hemoglobin E carrier(heterozygous) or homozygous Hemoglobin E(EE) is married to a Beta thalassemia trait, the child may be born with Hemoglobin E –beta thalassemia disease. Hemoglobin E –beta thalassemia disease is a chronic disease that can have many complications and may not be cured.
Screening Hemoglobin E in couples helps doctors in genetic counseling especially in case of Hemoglobin E –beta thalassemia disease, termination of pregnancy may be considered.
An effective screening and diagnostic test is required to the successful prevention of thalassemia in the population.
3.Principle
Ionic exchange is the principle of this test. When hemoglobin is in specific solution, it has electrical charges. When the solution is passed through column, all hemoglobin are caught by the column. Then a second solution is passed through anion exchanger column, only Hemoglobin E is eluded from the column and can be visualized as red color in test tube. The color intensity depends on the concentration of Hemoglobin E.
4.Instruments
1. 10 Microcolumns
2. Buffer A 220ml.1 bottle
3. Buffer B 440ml. 1 bottle
4. Washing 1 220ml. 1 bottle
5. Washing 2 440 ml 2bottles
6. Plastic test tube 10 ml
7. instruction manual
5. Preparation
1. EDTA venous whole blood sample (can be kept 2-8C for 3days)
2. whole blood sample is not recommended to be frozen6. Notice
1. this product can be kept 1-30C
2. this product should be kept away from heat and moisture
3.Expired column and solution should not be used
7. Caution
1.this product is for screening only
2.food and smoking are prohibited during blood sampling and testing
3.universal precaution
4.Aspetic instruments and place are maintained
5.read instruction manual thoroughly before testing
8.Instructions
1.Open cap of microcolumn, pour buffer in the column out, and disconnect end plug
2.Place microcolumn in test tube that provides in package
3.Pour buffer A 2ml (push 1 time) into microcolumn
4. Pipette whole blood 10 uL. into microcolumn
5. Wait until buffer A totally pass through microcolumn about 10 minutes
6. Pour buffer B 4ml (push 2 times) into microcolumn about 40 minutes
8. Wait until buffer B totally pass through microcolumn
9.Interpretation/analysis
Note: Other details in technical procedures are to be presented by our company representatives.Washing for Re-use
Wash1 : Place used microcolumn in test tube that provides in package
Pour Washing1 solution 2 ml (push 1 time) into microcolumn and wait until Washing 1 totally pass through microcolumn
Wash2 : Pour Washing2 solution 6 ml (push 3 times) into microcolumn and wait until Washing 2 totally pass through microcolumn
Pour Washing2 solution 2ml (push 1 time) into microcolumn, For preserve microcolumn before use again next time.
* microcolumn can be reused up to 10 times*
9. Interpretation/analysis
Homozygous HbE (EE) : strong red color in test tube
Homozygous HbE (EE) : light red-pink color in test tube
10.Limitation
1.This product is a screening test, a diagnostic or confirmation test should be considered by physician.
********************************************************************************************************************
E-SURE ชุดตรวจคัดกรองพาหะธาลัสซีเมีย ฮีโมโกลบินอี
1. ข้อบ่งใช้และคุณประโยชน์
ชุดตรวจคัดกรองฮีโมโกลบินอี (E-Sure) เป็นชุดตรวจเชิงคุณภาพที่ใช้ในการตรวจหาฮีโมโกลบินอี ซึ่งเป็นฮีโมโกลบินที่ผิดปกติในสายชนิด beta polypeptide (ß- globin chain) โดยอาศัยคุณสมบัติการจับกันของประจุที่แตกต่างกันเมื่ออยู่ในสารละลายที่มีคุณสมบัติเฉพาะ การใช้น้ำยาที่มีสูตรพิเศษมีผลทำให้ฮีโมโกลบินอีชนิดเดียวเท่านั้นออกจากคอลัมน์ ปฏิกิริยาสุดท้ายแปลผลจากสีปรากฏในหลอดทดลอง
2. ข้อมูลสังเขป
Hemoglobin E เป็น Hemoglobin ผิดปกติจัดอยู่ในกลุ่ม β thalassemia มีอุบัติการณ์สูง 10-50% ผู้เป็นพาหะของยีน Hemoglobin E (heterozygous) หรือ homozygous Hemoglobin E (EE) เมื่อแต่งงานกันผู้เป็นพาหะของยีน β thalassemia จะเป็นคู่สมรสเสี่ยงที่อาจให้บุตรเป็นโรคโลหิตจางธาลัสซีเมียชนิดรุนแรง (Hemoglobin E beta – thalassemia) เด็กที่ป่วยด้วยโรคนี้จะมีภาวะโลหิตจางเรื้อรัง มีโรคแทรกซ้อนมากมาย และรักษาไม่หาย บางคนอยู่ได้5-10ปีเท่านั้น
การตรวจพบ Hemoglobin E ในคู่สมรส จะช่วยให้แพทย์สามารถให้บริการทางเวชพันธุศาสตร์ที่เหมาะสมได้โดยเฉพาะในรายที่บุตรในครรภ์ เป็น โรค Hemoglobin E beta – thalassemia อาจพิจารณาแนวทางรักษาที่เหมาะสมต่อไปหรืออาจพิจารณายุติการตั้งครรภ์ได้
ดังนั้นการตรวจวินิจฉัยที่มีประสิทธิภาพและถูกต้องแม่นยำจึงเป็นผลดีต่อการป้องกันโรคที่จะถ่ายทอดต่อไปสู่ลูกหลาน
3. หลักการทดสอบของชุดตรวจ
หลักการทดสอบ ใช้หลักการ Ionic Exchange โดยใช้คุณสมบัติ ชนิด และ โครงสร้างของฮีโมโกลบินแต่ละชนิดซึ่งมีประจุแตกต่างกัน เมื่อฮีโมโกลบินอยู่ในสารละลายที่มีคุณสมบัติเฉพาะ ฮีโมโกลบินจะเกิดประจุไฟฟ้า เมื่อนำสารละลายที่มีฮีโมโกลบินผ่านลงใน column ฮีโมโกลบินโมเลกุลทุกตัวจะถูก column ดักจับไว้ และเมื่อใช้น้ำยาที่มีสูตรพิเศษผ่านลงใน column ฮีโมโกลบินอีจะหลุดและไหลออกจาก column เพียงชนิดเดียวและเห็นเป็นน้ำสีแดงในหลอดทดลอง ซึ่งความเข้มของสีจะแปรผันตามปริมาณของฮีโมโกลบินอี
4. อุปกรณ์ที่จัดไว้ในชุดทดสอบ
1. Micro-column 10 หลอด
2. Buffer A ปริมาตร 220 มิลลิลิตร จำนวน 1 ขวด
3. Buffer B ปริมาตร 440 มิลลิลิตร จำนวน 1 ขวด
4. น้ำยาWashing1 ปริมาตร 220 มิลลิลิตร จำนวน 1 ขวด
5. น้ำยาWashing2 ปริมาตร 440 มิลลิลิตร จำนวน 2 ขวด
6. หลอดพลาสติกใสขนาด 10 มิลลิลิตร จำนวน 10 อัน
7. เอกสารกำกับการใช้
5. การเตรียมตัวอย่างเลือด
1. ชุดตรวจคัดกรองฮีโมโกลบินอี (E-Sure) ใช้เลือดครบส่วน (whole blood) ที่เก็บจากการเจาะเส้นเลือดดำที่ใส่สารกัน
เลือดแข็งชนิดอีดีทีเอ (EDTA) หรือเฮพาริน (Heparin) หากไม่สามารถทดสอบได้ควรเก็บที่อุณหภูมิ 2-8 ºc ได้นาน 3 วัน
2. ไม่ควรเก็บตัวอย่างที่เป็นเลือดครบส่วน(whole blood)โดยการแช่แข็ง
6. ข้อควรระวัง
1. ควรเก็บชุดตรวจคัดกรองฮีโมโกลบินอี (E-Sure) ไว้ที่อุณหภูมิ 1-30 ºc
2. ควรเก็บชุดตรวจคัดกรองฮีโมโกลบินอี (E-Sure)ให้พ้นจากบริเวณที่มีความชื้นและความร้อนสูง
3. ไม่ควรใช้ชุดทดสอบและน้ำยา Buffer ที่หมดอายุแล้ว
7. คำเตือน
1. ชุดตรวจคัดกรองฮีโมโกลบินอี (E-Sure) ใช้สำหรับการตรวจคัดกรองวินิจฉัยโรคเท่านั้น
2. ห้ามรับประทานอาหาร ดื่มเครื่องดื่ม หรือสูบบุหรี่ ในขณะการทดสอบและเก็บตัวอย่างเลือด
3. สวมถุงมือ เสื้อกันเปื้อนเมื่อสัมผัสตัวอย่าง และล้างมือให้สะอาดหลังการทดสอบ
4. ทำความสะอาดอุปกรณ์ และบริเวณทดสอบด้วยน้ำย่าเชื้อ
5. อ่านใบกำกับเครื่องมือแพทย์อย่างละเอียดรอบคอบก่อนการใช้งาน
6. ระมัดระวังการสัมผัสตัวอย่างเลือด เสมือนว่าเลือดนั้นมีความเสี่ยงสูงต่อการติดเชื้อ
7. ทิ้งชุดทดสอบที่ใช้แล้วในที่ที่เหมาะสม เสมือนว่ามีสารปนเปื้อนที่ทำติดเชื้
8. วิธีทดสอบ
1. นำ Micro-columมาเปิดฝา เท Buffer ที่อยู่ใน column ทิ้ง และปลดจุกที่ปลายหลอด
2. นำ Micro-column ใส่ลงในหลอดพลาสติกที่จัดเตรียมให้ในชุดทดสอบ
3. เติม Buffer A ปริมาตร 2 ซีซี ( กด 1 ครั้ง)ใส่ลงใน Micro column
4. Pipette whole blood 10 ไมโครลิตร ผสมกับ Buffer A ใน Micro column ปล่อยให้ buffer ไหลลงจนหมด รอประมาณ 10 นาที
5. เติม Buffer B ปริมาตร 4 ซีซี ( กด 2 ครั้ง)ใส่ลงใน Micro column ปล่อยให้ buffer ไหลลงจนหมด รอประมาณ 40 นาที
6. อ่านผลการทดสอบจากสีที่เกิดขึ้นในหลอดทดลอง
หมายเหตุ : ในขั้นตอนการทดสอบ ควรศึกษาเทคนิคการทำจากคู่มือการใช้ให้ชัดเจน หรือจากผู้แทนจำหน่ายของทางบริษัท
การเตรียม Micro column เพื่อใช้ครั้งต่อไป
ล้างครั้งที่ 1 นำ Micro column ที่ใช้แล้วใส่ลงในหลอดพลาสติกที่จัดเตรียมให้ในชุดทดสอบ ดูด Washing1
ปริมาตร 2 ซีซี ( กด 1 ครั้ง)ใส่ลงใน Micro column และใช้ ปล่อยให้ Washing 1ไหลลงจนหมด
ล้างครั้งที่ 2 เติมน้ำยา Washing2 ปริมาตร 6 ซีซี (กด 3 ครั้ง) ใส่ลงใน Micro column และปล่อยให้ Washing 2ไหลลงจนหมด จากนั้นเติมน้ำยา Washing2 ปริมาตร 2 ซีซี (กด 1 ครั้ง) ปิดจุกให้แน่น เพื่อใช้รักษาสภาพ Micro column สำหรับเตรียมการใช้ในครั้งต่อไป
ประสิทธิภาพของ column
Micro column ที่ใช้แล้ว เมื่อนำมาล้างตามขั้นตอนการล้าง สามารถใช้ซ้ำได้ 10 ครั้ง
9. การแปลผลการทดสอบ
ผลลบ ( Negative ) : หลอดแก้วมีสารละลายใส ไม่มีสี
ผลบวก ( Positive ) : หลอดทดลองมีสีแดงเข้ม หรือแดง-ชมพูอ่อน
ข้อสังเกต : ควรใช้การตรวจวิธี Hb Typing เพื่อยืนยันผลการทดสอบ
Homozygous HbE (EE) : สารละลายมีสีแดงเข้ม
Heterozygous HbE (EA) : สารละลายสีแดง-ชมพู
10. ข้อจำกัดของชุดทดสอบ
ชุดตรวจคัดกรองฮีโมโกลบินอี (E-Sure) เป็นการตรวจคัดกรองพาหะธาลัสซีเมียฮีโมโกลบินอี (screening test)
ควรตรวจยืนยันการวินิจฉัย (confirmation test) ก่อนการตัดสินใจทางการแพทย์
----------------------------------------------------------------------------------------------------